همسانه سازی و تعیین خصوصیات ساختاری ژن ?-آمیلاز حاصل از bacillus cereus zk1

آنزیم ?-آمیلاز، از آنزیم های رایج در صنایع مختلف از جمله صنعت داروسازی می باشد این آنزیم پیوندهای ?-1و4- گلیکوزیدی را در ساختار آمیلوز هیدرولیز می نماید. باکتری kz1 bacillus cereus یک سویه ی بومی مولد ?-آمیلاز مقاوم به حرارت می باشد. در این تحقیق آنزیم مذکور را از محیط کشت القایی و با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی جداسازی و خالص گردید. بررسی خصوصیات آنزیم خالص نشانگر وزن مولکولی 2/66 کیلودالتون و فعالیت ویژه u/mg471 می باشد. ژن کدکننده آنزیم مذکور تکثیر و در وکتور pbluescriptsk+ii کلون گردید. بررسی نتیجه تعیین توالی ژن نشان داد که ناحیه فریم خواندنی این ژن شامل 1758 نوکلئوتید می باشد که پروتئینی با 586 آمینواسید را کد می کند و از یک دومین کاتالتیک از خانواده 13 گلیکوزیل هیدرولازها و یک دومین در انتهای آمینی با ماهیت پولولانازی تشکیل شده است. این پروتئین تشابه بالایی با ?-آمیلازهای سایر باسیلوس ها نشان می دهد که با مقایسه توالی پروتئینی آنها با سویه های b.cereus گزارش شده، مشخص شد که در دمین کاتالیتیکی آنزیم، آمینواسید هیستیدین شماره 233 با آمینواسید تیروزین جایگزین شده است.